在基础研究中,5'端腺苷酰化酶也为DNA和RNA的结构和功能研究提供了新的思路。
T4 RNA连接酶2截短型(突变型)是一种经过基因工程改造的酶,通过引入特定的氨基酸突变(如R55K和K227Q),在保持高效连接活性的同时,显著降低了RNA的非特异性连接问题。这种酶能够特异性地将5'端预腺苷化的DNA或RNA连接到RNA的3'羟基末端,无需ATP参与反应。 特点 高效连接活性:能够高效连接预腺苷化的单链DNA或RNA。 低背景连接:突变型酶减少了RNA串联或自连成环等非特异性连接问题。 无核酸酶污染:经过严格测试,确保无核酸外切酶、切口酶或RNase残留。 热稳定性高:某些突变体在较高温度(如45℃和50℃)下仍保持较高的连接活性。 应用 T4 RNA连接酶2截短型(突变型)广泛应用于以下领域: 小RNA文库构建:用于二代测序(NGS)中的miRNA文库构建。 cDNA文库构建:将单链腺苷化引物连接至小RNA上。 链特异性cDNA文库构建:用于合成链特异性的cDNA文库。 使用方法 反应条件:在1×反应缓冲液中,25℃温育。 灭活条件:65℃加热20分钟。
这种方法不仅提高了纯化效率,还减少了杂质的干扰,使得蛋白质研究更加精准。
BRD2(Bromodomain-containing protein 2)是一种含有溴结构域的蛋白质,广泛参与基因表达调控、细胞周期控制和细胞分化等重要生物学过程。BRD2通过识别和结合组蛋白上的乙酰化位点,调节基因的转录活性,从而影响细胞的生理功能和病理状态。BRD2 (65-459aa) 是BRD2蛋白的一个关键功能片段,包含了溴结构域的核心区域,具有重要的生物学功能。 BRD2的功能与结构 BRD2蛋白包含多个功能域,其中溴结构域是其关键功能区域之一。溴结构域能够特异性地识别组蛋白上的乙酰化赖氨酸残基,从而调控基因的转录活性。BRD2通过与乙酰化组蛋白的结合,招募其他转录因子和染色质重塑复合物,从而调节基因的转录活性。此外,BRD2还参与细胞周期的调控,特别是在G1期和S期的转换中发挥重要作用。 BRD2 (65-459aa)的功能片段 BRD2 (65-459aa) 是BRD2蛋白的一个关键功能片段,包含了溴结构域的核心区域。这个片段在基因表达调控中具有重要作用,尤其是在识别和结合组蛋白上的乙酰化位点方面。
建议使用2.0%-2.5%的琼脂糖凝胶,电泳电压4-10 V/cm,电泳时间20-25分钟。
β-catenin肽是一种源自β-catenin蛋白的关键片段,广泛应用于细胞信号传导和癌症研究。β-catenin在细胞黏附和Wnt信号通路中发挥着重要作用,其异常表达与多种癌症的发生和发展密切相关。 一、β-catenin Peptide的结构与功能 β-catenin肽通常包含β-catenin蛋白的关键功能区域,这些区域在细胞信号传导和细胞黏附中具有重要作用。β-catenin蛋白通过与E-钙黏蛋白(E-cadherin)结合,维持细胞间的黏附。此外,β-catenin在Wnt信号通路中也起着关键作用,通过调节基因表达,影响细胞的增殖、分化和存活。 二、β-catenin Peptide在细胞信号传导中的作用 在Wnt信号通路中,β-catenin肽能够模拟β-catenin的功能,激活下游信号通路。当Wnt信号存在时,β-catenin肽可以抑制β-catenin的降解,使其在细胞质中积累并转移到细胞核内,激活特定基因的表达。这种机制对于细胞的正常发育和组织稳态至关重要。 三、β-catenin Peptide在癌症研究中的应用 β-catenin肽在癌症研究中具有重要意义。
在皮肤损伤模型中,双调蛋白能够促进角质形成细胞的增殖和迁移,有助于伤口愈合。
10× DNA/RNA非变性上样缓冲液是一种用于核酸电泳的浓缩缓冲液,广泛应用于DNA和RNA的非变性凝胶电泳。它主要由甘油、溴酚蓝、二甲苯青等成分组成。这种缓冲液在稀释至1×后,比重较大,能使核酸样品在加样后迅速沉入凝胶孔中,同时其中的染料可以作为电泳指示剂。 优势 适用范围广:适用于双链DNA、单链DNA、RNA引物、小RNA及特定RNA的电泳。 操作简便:使用时只需将核酸样品与缓冲液按9:1的比例混合即可。 安全无污染:无RNase杂质污染,确保RNA样品的完整性。 使用方法 混合样品:将DNA或RNA样品与10×非变性上样缓冲液按9:1的比例混合均匀。 上样:将混合后的样品加入凝胶加样孔中。 电泳:根据实验需求进行电泳,观察染料迁移情况以判断电泳进程。 注意事项 防止核酸降解:操作过程中需使用无RNase的耗材,避免RNA降解。 避免反复冻融:建议分装保存,避免反复冻融影响缓冲液性能。 染色:可在样品或凝胶中预先加入核酸染料,或在电泳结束后对凝胶染色。 10× DNA/RNA非变性上样缓冲液凭借其高效、安全和操作简便的特点,已成为分子生物学实验中核酸电泳的常用工具。
λ DNA HindIII + EcoRI是一种常用的DNA分子量标准,广泛应用于琼脂糖凝胶电泳中。
pA-Tn5转座酶是一种新型融合酶,由高活性的Tn5转座酶与Protein A融合而成。它兼具Tn5转座酶的高效DNA切割能力和Protein A的抗体结合能力,广泛应用于CUT&Tag(Cleavage Under Targets and Tagmentation)技术,用于研究蛋白质与基因组DNA的相互作用。 工作原理 pA-Tn5转座酶通过Protein A与特异性抗体结合,被引导至目标蛋白所在的染色质区域。在该区域,Tn5转座酶能够高效切割DNA,并在切割位点插入测序接头。随后,通过PCR扩增,生成可用于高通量测序的文库。 应用场景 CUT&Tag技术:用于研究蛋白质与基因组DNA的相互作用,如转录因子结合位点、组蛋白修饰分布等。与传统的ChIP-Seq相比,CUT&Tag具有更高的信噪比、更好的可重复性、更短的实验周期(1天完成从细胞到文库构建),且所需细胞量更少。 高通量测序文库构建:pA-Tn5转座酶能够快速片段化DNA,并直接连接测序接头,简化了文库构建的步骤。 单细胞测序:可用于单细胞基因组学研究,通过切割和标记单细胞中的DNA,实现高通量测序。
此外,Flt-3L-His在小鼠模型中的应用也为研究自身免疫性疾病提供了新的视角。
MCP-2(单核细胞趋化蛋白-2,Monocyte Chemoattractant Protein-2),也称为CCL8,是一种重要的趋化因子,属于CC趋化因子家族。它在免疫系统中发挥着关键作用,主要通过调节免疫细胞的迁移和激活来维持免疫平衡。MCP-2广泛存在于多种细胞和组织中,包括单核细胞、巨噬细胞、内皮细胞和成纤维细胞等。 MCP-2的结构与功能 MCP-2是一种小分子蛋白,由76个氨基酸组成,分子量约为8.5kDa。它通过与特定的G蛋白偶联受体结合,发挥其生物学功能。MCP-2的主要受体包括CCR1、CCR2和CCR5,这些受体广泛表达在免疫细胞上,如单核细胞、巨噬细胞和某些T细胞亚群。 在免疫细胞迁移中的作用 MCP-2在免疫细胞的迁移中起着重要作用。它能够吸引单核细胞、巨噬细胞和某些T细胞亚群向炎症部位迁移,从而增强免疫反应。例如,在感染或组织损伤时,MCP-2的释放能够引导免疫细胞迅速到达受损组织,发挥免疫监视和清除功能。 在炎症反应中的作用 MCP-2不仅促进免疫细胞的迁移,还参与调节炎症反应。它能够增强单核细胞和巨噬细胞的吞噬能力,促进其对病原体和受损细胞的清除。
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