6×DNA 在不同浓度的琼脂糖凝胶中,溴酚蓝和二甲苯青的迁移速率稳定,为实验提供可靠的参考
在分子生物学实验中,DNA凝胶电泳是一种常用的分析技术,用于分离和检测DNA片段。而10×DNA Loading Buffer则是这一实验中不可或缺的重要试剂。它是一种10倍浓缩的上样缓冲液,专门用于DNA凝胶电泳,能够帮助DNA样品顺利沉入凝胶加样孔中,并在电泳过程中提供清晰的指示。 10×DNA Loading Buffer的主要成分包括甘油、溴酚蓝、二甲苯青FF和SDS。甘油的作用是增加样品的密度,确保DNA样品能够沉入凝胶孔中,防止样品漂浮。溴酚蓝和二甲苯青FF作为指示剂,分别指示电泳的进程,帮助实验者判断电泳是否达到最佳分离效果。在1%琼脂糖凝胶中,二甲苯青FF的迁移速率与4000个碱基对的DNA片段大致相同,而溴酚蓝的迁移速率则与约500个碱基对的DNA片段相同。 使用10×DNA Loading Buffer时,通常按照1:9(上样缓冲液:DNA样品)的比例混合。例如,对于9μL的DNA样品,加入1μL的10×DNA Loading Buffer,混匀后即可上样。这种缓冲液适用于多种类型的DNA样品,包括PCR产物、质粒DNA和基因组DNA等。
高灵敏度:对核酸的迁移影响小,信噪比高,荧光信号强,背景信号低。
DNA Marker I Plus是一种即用型的DNA分子量标准,广泛应用于琼脂糖凝胶电泳中,用于估算DNA片段的大小。它由7条线状双链DNA条带组成,覆盖100 bp到700 bp的范围,条带大小分别为100 bp、200 bp、300 bp、400 bp、500 bp、600 bp和700 bp。产品特性即用型设计:已预混1×Loading Buffer,可直接取2-5 µL进行电泳,无需额外处理。清晰的电泳条带:条带浓度均匀,其中400 bp条带为加亮带,便于观察。适用范围:适用于100 bp到700 bp的DNA片段分析,不建议用于聚丙烯酰胺凝胶电泳。使用方法上样量:根据电泳梳子的厚度和宽度确定上样量。一般情况下,每1 mm × 1 mm的加样孔上样1 µL;窄齿梳子(1 mm × 2 mm)上样2 µL;宽齿梳子(1 mm × 5 mm)上样5 µL。电泳条件:建议使用2.0%-2.5%的琼脂糖凝胶,电泳电压4-10 V/cm,电泳时间20-25分钟。染色与观察:电泳结束后,使用EB或Goldview等染料染色,然后在紫外灯下观察条带。
热敏UDG在分子诊断和PCR实验中表现出色,尤其适用于需要严格控制污染的实验环境
phi29 DNA Polymerase 是一种源自 Bacillus subtilis 噬菌体 phi29 的重组酶,具有极高的过程性(processivity)和链置换活性,能够在等温条件下高效扩增DNA。这种酶还具有3'→5'外切酶(校对)活性,能够确保DNA合成的高保真性。特性与优势 高过程性:phi29 DNA Polymerase 可以合成超过70 kb的长DNA片段,无需辅助蛋白。链置换活性:强大的链置换能力使其能够在等温条件下高效扩增DNA。高保真性:3'→5'外切酶活性能够实时校正错误,确保DNA复制的高准确性。等温扩增:无需复杂的温度循环,适合快速、高效的DNA扩增。应用场景phi29 DNA Polymerase 广泛应用于多种分子生物学实验:滚环扩增(RCA):用于生成周期性DNA纳米模板,适合检测低丰度核酸。多重置换扩增(MDA):一种等温扩增技术,能够在恒定温度下进行全基因组扩增。全基因组扩增(WGA):用于从微量DNA样本中扩增全基因组,适用于单细胞测序。DNA模板制备:可用于测序的高质量DNA模板制备。
这种染料在紫外光或可见光下均能发出明亮的绿色荧光,背景信号低,信噪比高,能够清晰地显示核酸条带。
在分子生物学研究和临床检测中,多重实时荧光定量PCR(qPCR)技术因其能够同时检测多个靶标而备受关注。然而,多重qPCR实验的成功依赖于高特异性、高灵敏度以及可靠的防污染体系。Multiplex Probe qPCR Mix (2X, UDG Plus)凭借其卓越的性能,成为实现这一目标的理想选择。 该试剂盒是一种2×预混液,专为多重qPCR设计,支持探针法进行高效的基因定量分析。它含有化学修饰的热启动Taq DNA聚合酶、优化的反应缓冲液、dNTPs以及UDG(尿嘧啶DNA糖基化酶)。UDG通过降解含有尿嘧啶的DNA,有效防止了PCR产物的气溶胶污染,从而避免假阳性结果的出现。 此外,该试剂盒还采用了dUTP替代dTTP的技术,进一步提高了反应的特异性,减少了非特异性扩增的可能性。其优化的反应体系能够支持多达四重的qPCR反应,大大提高了实验效率。 Multiplex Probe qPCR Mix (2X, UDG Plus)不仅操作简便,还具有广泛的适用性。它适用于多种qPCR仪器平台,包括Applied Biosystems、Bio-Rad、Eppendorf等品牌。
电泳结束后,使用溴化乙锭(EB)或其他DNA染料染色,在紫外灯下观察条带。
在分子生物学和生物医学研究中,逆转录定量PCR(RT-qPCR)是一种广泛使用的高灵敏度和高特异性的基因表达分析技术。One Step RT-qPCR SYBR Green Kit作为一种一体化的试剂盒,为研究人员提供了一种高效、便捷的一步法RT-qPCR解决方案,特别适用于需要快速、准确检测RNA样本的实验场景。 一步法RT-qPCR的优势 传统的RT-qPCR实验通常需要先进行逆转录反应,将RNA转录为cDNA,然后再进行qPCR扩增。这种方法虽然能够获得准确的结果,但操作步骤繁琐,容易引入误差。而One Step RT-qPCR SYBR Green Kit采用了一步法设计,将逆转录和qPCR扩增整合到同一个反应体系中,大大简化了操作流程,减少了人为误差,提高了实验的重复性和可靠性。 产品特点 高效逆转录酶:该试剂盒含有高效的逆转录酶,能够在短时间内将RNA转录为cDNA,确保逆转录反应的高效进行。 优化的反应体系:试剂盒中的反应体系经过优化,包含SYBR Green荧光染料、热启动Taq DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺等所有必需成分,确保了qPCR反应的高效扩增。
胶染法(前染):在制备琼脂糖凝胶时,按 1:10000 的比例加入 4S GelRed 染料
在荧光定量PCR(qPCR)实验中,探针法因其高特异性和高灵敏度而被广泛应用于基因表达分析、病原体检测和基因拷贝数变异分析等领域。然而,某些qPCR仪器(如ABI系列)需要低浓度的ROX参考染料来校正孔间荧光信号的差异。Probe qPCR Mix (2×, Low ROX)正是为这些特定需求而设计的优化试剂,它结合了高效的探针法qPCR反应体系和低浓度ROX的校正功能,为精准定量提供了有力支持。 低浓度ROX的必要性 在qPCR实验中,ROX参考染料通常用于校正荧光信号的非特异性变化,尤其是在高通量实验中。某些qPCR仪器(如ABI 7500、7900等)在低浓度ROX存在时能够更好地校正孔间差异,从而提高定量的准确性和重复性。Probe qPCR Mix (2×, Low ROX)中的ROX浓度经过精确调整,适用于这些需要低浓度ROX的仪器,同时避免了高浓度ROX可能带来的背景荧光干扰。 产品特点 优化的反应体系:Probe qPCR Mix (2×, Low ROX)含有优化的反应缓冲液、dNTPs、Mg²⁺、热启动Taq DNA聚合酶以及其他必要的成分。
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