适用于多种实验条件,包括不同的琼脂糖浓度和电泳电压(4-10 V/cm),能够根据实验需求灵活调整
4S Red Plus 核酸染色剂是一种高灵敏度、低毒性的荧光核酸染料,旨在替代传统的溴化乙锭(EB),广泛应用于琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳中的DNA和RNA染色。 产品特性安全性高:4S Red Plus 是一种油性大分子,分子量约为1,000,无法穿透细胞膜进入细胞内,诱变性远小于EB。Ames测试结果显示,该染色剂的诱变性极低,几乎没有致癌性。灵敏度高:对核酸的迁移影响小于SYBR Green I,能够提供清晰的条带。稳定性好:具有良好的热稳定性,可在热的琼脂糖溶液中直接添加,无需等待溶液冷却。信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。操作简单:与EB的使用方法相似,无需脱色或冲洗。适用范围广:可选择凝胶染色法和泡染法;适用于琼脂糖凝胶或丙烯酰胺凝胶电泳;可用于dsDNA、ssDNA或RNA染色。经济实惠:单次成本比银染和SYBR Green I低。使用方法胶染法(推荐方法):制备100 mL琼脂糖溶液,加热溶解后冷却至60-70℃。加入10 µL 4S Red Plus 核酸染色剂(10,000×)。轻柔混合(注意排去气泡)后铺胶。
25×聚蔗糖凝胶上样缓冲液广泛应用于核酸的琼脂糖凝胶电泳实验中。
2×TBE-Urea 上样缓冲液是一种专门用于变性核酸电泳的试剂,能够有效解除核酸的二级结构,使其保持单链构型,从而实现更清晰的电泳分离效果。组成成分 该缓冲液的主要成分包括:尿素(Urea):用于解除核酸的二级结构,保持核酸的单链状态。溴酚蓝(Bromophenol Blue) 和 二甲苯青(Xylene Cyanol FF):作为示踪染料,用于观察电泳的进程。Tris、硼酸和 EDTA:维持电泳过程中的缓冲体系,确保电泳条件的稳定。聚蔗糖(Ficoll):增加样品密度,帮助样品沉入凝胶孔中。 使用方法样品处理:将 2×TBE-Urea 上样缓冲液与待测核酸样品按 1:1 比例混合,70℃加热 3-5 分钟,使核酸充分变性,之后立即置于冰上冷却。上样与电泳:将处理后的样品加入变性聚丙烯酰胺凝胶的加样孔中,进行电泳。应用场景2×TBE-Urea 上样缓冲液主要用于单链 DNA(ssDNA)和 RNA 的变性凝胶电泳,广泛应用于基因分型检测(如 SSR 标记、AFLP、RFLP 等)。它不适用于非变性凝胶电泳或蛋白电泳。
4S Green 核酸染色剂广泛应用于琼脂糖凝胶电泳中的双链 DNA、单链 DNA 和 RNA 的检
λ核酸外切酶(Lambda Exonuclease)是一种来源于λ噬菌体的核酸外切酶,能够特异性地作用于双链DNA,沿5′→3′方向逐步去除5′端的单核苷酸。这种酶在分子生物学实验中具有广泛的应用。 工作原理 λ核酸外切酶的最适底物是5′端磷酸化的双链DNA。它能够高效地从5′端逐步降解双链DNA,生成单链DNA或单核苷酸。该酶对单链DNA和非磷酸化的双链DNA底物的降解效率较低,分别只有磷酸化双链DNA的1%和5%。此外,λ核酸外切酶不能从DNA的切刻或缺口处起始消化。 应用场景 单链DNA制备:通过降解双链DNA的一条链,λ核酸外切酶可用于制备单链DNA。例如,在PCR产物中,使用5′端磷酸化的引物,可以通过λ核酸外切酶特异性降解其中一条链,从而获得单链DNA。 DNA末端修饰:在某些克隆实验中,λ核酸外切酶可用于去除DNA片段的5′端核苷酸,以实现特定的末端修饰。 基因编辑:在基因编辑技术中,λ核酸外切酶可用于处理线性化质粒,以提高同源重组的效率。 DNA损伤研究:λ核酸外切酶可用于研究DNA损伤和修复机制,通过降解损伤的DNA片段来模拟细胞内的DNA修复过程。
通过对比不同GC含量和引物Tm值的体系,该试剂盒在多种复杂条件下均能保持高特异性,生成清晰的扩增曲线
在分子生物学实验中,核酸电泳是检测核酸片段大小和纯度的关键技术之一。3×甲酰胺凝胶上样缓冲液作为一种高效的辅助试剂,为核酸电泳提供了重要的支持。组成成分3×甲酰胺凝胶上样缓冲液的主要成分包括:甲酰胺(Formamide):高浓度的甲酰胺能够有效变性核酸,使其保持单链状态,避免核酸在电泳过程中形成二级结构,从而实现更准确的分子量测定。二甲苯青(Xylene Cyanol FF) 和 溴酚(Bromophenol Blue):这两种染料作为示踪剂,可帮助观察电泳的进程。二甲苯青迁移速度较慢,适用于较大片段的示踪;溴酚蓝迁移速度较快,适用于较小片段的示踪。EDTA(乙二胺四乙酸):螯合二价金属离子,防止核酸被核酸酶降解,同时维持电泳过程中的缓冲环境。使用方法样品混合:将核酸样品与3×甲酰胺凝胶上样缓冲液按体积比2:1混合,例如,5 μL核酸样品加入2.5 μL缓冲液。变性处理:混合后的样品在70℃加热5-10分钟,使核酸充分变性。加热后立即置于冰上冷却,以防止核酸重新折叠。电泳上样:将处理后的样品加入凝胶的加样孔中,进行电泳。
后染时,将电泳后的凝胶浸泡在稀释后的染色液中,室温振荡染色10-30分钟。
在分子生物学和生物医学研究中,荧光定量PCR(qPCR)是基因表达分析和病原体检测的核心技术之一。One Step RT-qPCR SYBR Green Kit (UDG Plus)通过整合尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)技术,为研究人员提供了一个高效、防污染且便捷的一步法qPCR解决方案,特别适用于需要快速、准确检测RNA样本的实验场景。 一步法RT-qPCR的优势 传统的RT-qPCR实验通常需要先进行逆转录反应,将RNA转录为cDNA,然后再进行qPCR扩增。这种方法虽然能够获得准确的结果,但操作步骤繁琐,容易引入误差。而One Step RT-qPCR SYBR Green Kit (UDG Plus)采用了一步法设计,将逆转录和qPCR扩增整合到同一个反应体系中,大大简化了操作流程,减少了人为误差,提高了实验的重复性和可靠性。 UDG技术的防污染机制 UDG技术是该试剂盒的核心亮点之一。UDG能够特异性识别并降解含有尿嘧啶(U)的DNA,从而防止实验室中残留的PCR产物污染。在qPCR反应开始前,UDG会降解引物或模板中的尿嘧啶,防止非特异性扩增。
在模拟污染实验中,UDG防污染系统能够有效降解含尿嘧啶的DNA污染避免了假阳性结果的出现确保了可靠性
在分子生物学研究和临床检测中,快速、准确地检测RNA序列是许多实验的关键。One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus)凭借其独特的优势,成为实现这一目标的理想选择。 该试剂盒采用一步法RT-qPCR技术,将逆转录和定量PCR反应集成在同一管中完成。这种设计不仅简化了操作流程,减少了移液步骤,还有效降低了样本间交叉污染的风险。同时,试剂盒中加入了UDG(尿嘧啶DNA糖基化酶),能够降解含有尿嘧啶的PCR产物,从而有效防止因残留产物导致的假阳性结果。 One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus)还具备高灵敏度和高特异性的特点。它采用了优化的反应体系,能够高效合成cDNA,并在后续的qPCR中实现精准定量。即使对于低丰度的RNA模板,该试剂盒也能准确识别,特别适合检测微量RNA。此外,其热启动Taq DNA聚合酶和优化的反应条件,进一步提高了扩增效率和特异性。 在实际应用中,One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus)广泛适用于检测总RNA、mRNA、RNA病毒等样本。
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